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多管齐下,严防非洲猪瘟变异株

发布时间 : 2021-06-28 16:01:50

一、非洲猪瘟变异株的定义

非洲猪瘟变异株包括基因缺失株、自然变异株、自然弱毒株等,与2018年传入的非洲猪瘟毒株相比,该类毒株的基因组序列、致病力等发生明显变化。生猪感染该类毒株后,潜伏期延长,临床表现轻微,后期可出现关节肿胀、皮肤出血型坏死灶,感染母猪产仔性能下降、死淘率增高,出现流产死胎/木乃伊胎等。与传统的流行毒株相比,生猪感染该类毒株后排毒滴度低、间隙性排毒,难以早期发现。

二、监测方法

(一)加强临床巡视

时刻关注猪场各个环节猪只异常情况,想方设法提升饲养人员责任心,一旦发现猪只出现嗜睡、轻触不起、采食量减少,发热、皮肤发红、关节肿胀/坏死、咳喘、腹式呼吸,育肥猪死淘率增高,母猪流产或出现死胎/木乃伊胎等可疑临床表现时,应第一时间采样检测。

(二)改进主动监测

每周对猪群进行病原和抗体检测。在猪群进行疫苗接种、转群、去势,或母猪分娩后,应进行采样检测。猪场出现风险暴露或周边猪场出现感染时,按需进行采样检测。

(三)抽样策略

对可疑猪的同舍和关联舍猪群,采集深部咽拭子和抗凝血,进行病原检测,必要时采集血清进行抗体检测。对可疑猪及临近猪接触的地面、栏杆,以及舍内人员接触的物品等,采集环境样品进行病原检测。病原检测如果混检,建议混样数量不超过5个;抗体检测不得混样。

(四)样品选择

1. 对可疑猪,按检出概率高低排序,依次采集深部咽拭子、前腔静脉抗凝血(EDTA)或尾根血、口鼻拭子。

2. 对分娩母猪,应采集脐带血、胎衣;对死胎和流产胎儿,应采集淋巴结、脾脏等组织样品。

3. 对病死猪,优选采集部位为淋巴结、脾脏、骨髓和肺脏。

4. 血清样本,按常规方法制备。

三、检测方法及配套

(一)采样

猪场用户在进行环境样监测或者群体普查时,可在采样时使用快灵的软拭子和多腔体病毒采样管进行高效采样及混样。

软拭子头部具有弹性,弹性绒毛拭子头较容易弯曲来适应猪场不同的异性部位,增大采样接触面积,其面积比普通纺锤形拭子多2-3倍,能更多采集目标样品。

多腔体采样管不同于市面上传统的采样管,其内部结构分别为洗涤腔及挤存腔,洗涤腔体内设有多个竖向刮擦片,对进入腔体中旋转的拭子进行接触刮擦,帮助绒毛表面的样品洗脱释放。多个挤存钱腔可以最多十根软拭子,释放了样本后将拭子插入洗涤腔上部的挤压腔,可将弹性植绒拭子吸附的洗脱液挤压出来并从缝隙部位回流到洗涤腔。相比传统采样管,仅用少于1/5容积的液体就能充分对拭子样品进行洗涤,能直接提高采样溶液病原浓度达5-6倍。

(二)病原检测方法

原则上参照“农办牧〔2020〕39号”附件《非洲猪瘟病毒流行株与基因缺失株鉴别检测规范》。

对采集的样本进行核酸提取,可选用快灵的手动柱法提取试剂盒,样本量太大可使用快灵磁珠提取试剂盒。

扩增时建议选用快灵ASFV流行株/基因缺失变异株鉴别试剂盒,即P72/MGF/CD2V鉴别试剂盒(下称鉴别试剂盒),为了适配不同客户的不同仪器,快灵鉴别试剂盒在标准试剂盒的基础上进行部分优化,仅涉及检测项目,试剂盒灵敏度、特异性等基本功能保持一致,方便客户根据不同的需求进行选择。不同试剂盒性能见表1:

表1:不同鉴别试剂盒性能说明

性能

非洲猪瘟病毒P72/CD2V荧光PCR鉴别试剂盒

非洲猪瘟病毒P72/MGF荧光PCR鉴别试剂盒

非洲猪瘟病毒P72/CD2V/MGF荧光PCR鉴别试剂盒(三重双通道)

非洲猪瘟病毒P72/CD2V/MGF荧光PCR鉴别试剂盒(标准版)

鉴别基因型

P72/CD2V

P72/MGF

P72/CD2V/MGF

P72/CD2V/MGF

所需通道

双通道

双通道

双通道

具备熔解曲线功能

三通道

反应方式

PCR扩增

PCR扩增

PCR扩增+熔解曲线反应

PCR扩增

反应时长

55min

55min

70min(扩增+熔解)

55min

反应体系

25μL

25μL

25μL

25μL

判读方式

Ct值判读

Ct值判读

Ct值与Tm值综合判读

Ct值判读

规格

50T/

50T/

50T/

50T/

灵敏度

400copies/mL

400copies/mL

400copies/mL

400copies/mL

特异性

≥99.9%

≥99.9%

≥99.9%

≥99.9%

敏感性

≥99.9%

≥99.9%

≥99.9%

≥99.9%

稳定性

CV<3%

CV<3%

CV<3%

CV<3%

UDG

 

(三)抗体检测方法  采用间接ELISA、阻断ELISA等方法检测抗体水平,详见《非洲猪瘟诊断技术》(GB/T 18648)

抗体检测的意义对于急性疾病的爆发,病毒检测(PCR)最有用,血清学诊断价值较低,因为感染的猪大多数在抗体产生之前死亡;非洲猪瘟变异株(包括基因缺失株、自然变异株、自然弱毒株等)的出现,生猪感染该类毒株后,潜伏期延长,临床表现轻微,感染该类毒株后排毒滴度低、间隙性排毒,难以早期发现,因此抗体检测的作用凸显。如果没有接种过疫苗,抗体的存在表明感染过非洲猪瘟病毒。上海快灵非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒(间接法)系用大肠杆菌表达的非洲猪瘟病毒P30蛋白包被酶标板,P30蛋白是病毒的主要结构蛋白,在感染的早期表达和分泌,可用于感染后免疫反应的的早期检测。

ELISA抗体检测原理 ELISA试剂盒是根据固相酶联免疫吸附试验设计而成的。在本检测过程中,样本暴露于包被在微量板孔内的非感染性非洲猪瘟抗原。非洲猪瘟抗体(如果检测样本中存在)则将与酶标板上抗原结合,经洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加TMB底物液,与酶反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有非洲猪瘟抗体。

上海快灵非洲猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒(间接法)使用便捷、快速、敏感性高、特异性强,是理想的非洲猪瘟病毒抗体测工具。


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